利用digital PCR开发循环microRNA检测新方法

最近，来自意大利肿瘤研究中心（FondazioneIRCCSIstitutoNazionaledeiTumori）的研究团队在BMCGenomics杂志上发表了1篇最新研究进展，他们首次利用QuantStudio3DdigitalPCR对肺癌病人的microRNA进行定量检测，这项技术有希望成为癌症临床研究中miRNAs分析的常规检测方法，利用digital PCR开发循环microRNA检测新方法。

文献来源：NovelmethodtodetectmicroRNAsusingchip-basedQuantStudio3DdigitalPCR.

MicroRNAs(miRNAs)是1类非编码RNAs，长约19⑵4个核苷酸，通过与mRNA的3’端非翻译区结合调控基因的表达。已有研究发现，在血浆、血清、唾液、痰、尿液等不同标本本中均能检测到了循环miRNA（circulatingmiRNAs），循环miRNA的表达水平与癌症进展，医治反应和患者生存期密切相干，表明循环miRNA是1种非常有潜力的无创生物标记物，可用于癌症等重大疾病的初期诊断和预后评估等。但是由于研究数据来源于不同的实验方法和技术，目前还没有统1的均1化方法处理数据，阻碍了循环miRNA研究的发展。

QuantStudio3DdigitalPCR是1种基于芯片的数字PCR技术，无需标准品就可以精准地绝对定量核酸分子，利用digital PCR开发循环microRNA检测新方法。文章中研究人员使用digitalPCR，可以对200ul血浆中的循环miRNA进行绝对定量，实验方法和流程以下：

在血浆样本、肺癌组织和细胞系中，研究人员对5个与肺癌产生相干的miRNA（mir⑴6⑸p,mir⑵1⑸p,mir⑴26⑶p,mir⑷86⑸pandmir⑹60⑸p）表达水平进行绝对定量，并验证了mir⑴6⑸p在正常肺组织和肺癌样本中的表达有显著差异。

为了验证该方法的可重复性，对5个不一样本进行平行重复实验和独立实验，结果显示intra-run和inter-run变异系数在4%左右，表明digitalPCR可重复性很好。

综上所述，digitalPCR可以绝对定量不同生物学标本的miRNA表达水平，例如肺癌病人的血浆或组织，有益于推动miRNA作为新型生物标记物的研究。