稀有细胞检测 不做无谓的牺牲

2017-05-24 14:21:05 来源:
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有些细胞在血液和组织中的含量很少但却很重要,比如干细胞、循环内皮细胞、循环肿瘤细胞和残留病变细胞。准确检测和分析这些稀有细胞,是理解疾病进程和发育机制的关键。但是稀有细胞检测其实不是1件容易的事,稀有细胞检测 不做无谓的牺牲,会遭到样本质量等多种因素的影响。

流式细胞技术能对每一个细胞进行多种定量分析,是在血液、骨髓等组织中检测稀有细胞的有力工具。稀有细胞检测常常需要大量样本才能收集到足够的数据,这个时候传统流式细胞仪也有些发怵,由于大样本意味着处理时间长,如果不想牺牲检测灵敏度,就不能贸然加快进样速率。

声波聚焦技术,不做任何无谓的牺牲

样本溶液注射到流式细胞仪的时候,细胞是随机散布在3维空间内的。让这些细胞逐一穿过激光束,对准确收集数据非常重要。绝大多数流式细胞仪通过快速活动的鞘液实现这1点。鞘液带动细胞并将其限制在中心位置,进而建立单细胞流,这1进程称为水动力聚焦。

与传统水动力聚焦不同的是,声波聚焦技术利用超声波将细胞紧密聚集在样本流中间,集聚成1条直线,稀有细胞检测 不做无谓的牺牲。这类超声波大于2MHz,与医学成像中的超声波类似。声波聚焦流式细胞仪基本不受进样速率的影响,能使细胞强聚焦于激光检测点,与样本-鞘液的比率无关。

传统的水动力聚焦技术遭到了很多限制。流速提高会增大样本流的宽度,使细胞的聚焦效果降落。细胞偏离激光中心越远,稀有细胞检测 不做无谓的牺牲,激起光强度变化就越大,CV值也越高。研究人员常常需要在分析通量和精度之间寻求平衡。

声波聚焦技术在很大程度上与进样流速无关,不论样本流与鞘液流的比例如何,都能使细胞紧密地聚集于激光检测焦点,避免分散。这样可以搜集更多光子,在极高的样本通量下保证高精度分析。

声波聚焦流式细胞仪在高达1mL/min的进样速率下也能保持精确聚焦,让研究人员能够获得更小的CV值,更好地鉴别弱阳性信号和背景,实现更小的差异和更好的信号分离。

不牺牲检测速度

稀有细胞检测1般需要收集大量细胞,才能取得准确而可靠的结果。在这类情况下,传统流式细胞仪需要很长的处理时间。不过,声波聚焦流式细胞仪的样本运行速率非常快(可达1,000μL/min),每次运行可收集2000万个细胞。这么高的样本搜集速率和样本量可以帮助人们快速准确地检测稀有细胞,不会影响数据的质量。

不牺牲珍贵样本

样本制备对稀有细胞检测有很大的影响。举例来讲,洗脱和裂解红细胞(RBC)会造成严重的细胞损失和损伤。声波聚焦流式细胞仪支持无洗脱、无裂解的流式实验方案,可以最大程度的保存珍贵样本,避免没必要要的细胞损失,简化样本制备步骤。

研究人员可以通过有目的地稀释样本来取代洗脱和裂解步骤,快速而有效地分析浓度较低的样本,比如脑脊液(CSF)、干细胞和细胞数量较少的稀释样本。对小鼠血液、骨髓等难以收集的样本、细针抽吸样本或低细胞产量样本,研究人员可以直接染色和稀释,无需洗脱或红细胞裂解。

值得1提的是,声波聚焦流式细胞仪处理全血样本可省去样本制备,既没有样本损失,也不会影响数据质量。

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