苏州医工所在血液制品细菌污染核酸检测方面取得进展

目前，核酸筛检系统（NucleicAcidsTesting，NAT）已广泛用于血制品常规病原体（乙肝、丙肝、艾滋、梅毒）的核酸检测，苏州医工所在血液制品细菌污染核酸检测方面取得进展，极大下降了相干疾病的输血传播，苏州医工所在血液制品细菌污染核酸检测方面取得进展。但是，在输血感染性风险中，血小板的细菌污染及相干败血症性输血反应还是辣手的问题。

图⑴、IRC两重荧光定量PCR原理图

图⑵、IRC两重荧光定量PCR性能测试

将核酸筛检技术用于细菌污染检测还有很多困难，包括：

1、细菌污染不像特定病原体，没有统1的标准品；

2、缺少合适的内参质控排除假阳性或假阴性结果；

3、核酸扩增聚合酶（Taq）大多是细菌来源，带有痕量的细菌核酸成份。

近期，中国科学院苏州生物医学工程技术研究所血液免疫学研究中心提出1种两重荧光定量PCR方法可提高细菌污染检测的可靠性：设计1条人工核酸序列（IRC）作为内参，其特点是IRC与靶基因共用同1对引物进行扩增，分别用不同荧光探针进行检测。

通过精确控制IRC分子数到达阳性检出限，以其Ct(i)值作为阈值，只有样本检测的Ct(s)值小于或等于Ct(i)时，苏州医工所在血液制品细菌污染核酸检测方面取得进展，检测结果才可认定为阳性。1种双样本混合的t测验（twosamplespooledt-test）统计学方法可用于帮助判断两个Ct值的大小。IRC还可以包装成噬菌体，苏州医工所在血液制品细菌污染核酸检测方面取得进展，用于监控核酸样本提取进程。

另外，该两重荧光定量PCR方法可通过分别检测细菌的DNA（脱氧核糖核酸）与RNA（核糖核酸），计算不同Ct的比值，能判断细菌是处于生长繁殖期或已是死菌，从而帮助判断血制品灭活的效果。该方法不但能用于血制品细菌污染检测，理论上也能开发成其他外源基因核酸定量检测的有效方法。