活细胞超分辨率显微技术研究获进展

2016年12月31日，中国科学院生物物理研究所徐平勇课题组、中国科学院计算技术研究所张法课题组和美国科学院院士HHMI研究员JenniferLippincott-Schwartz合作在《细胞研究》（CellResearch）在线发表了题为Live-cellsinglemolecule-guidedBayesianlocalizationsuper-resolutionmicroscopy的文章，介绍了1种新型活细胞超分辨率显微技术及其独特优势。

超分辨率荧光显微技术由于打破了传统光学衍射的限制，使得人们能够更深入地理解细胞生物学，取得了2014年诺贝尔化学奖。但是由于设备和时空分辨率的影响，活细胞超分辨率技术仍面临诸多挑战。

最近几年来，贝叶斯定位显微技术(Bayesiananalysisoftheblinkingandbleaching，3B)利用荧光蛋白漂白和闪烁的特性，通过分析全部图象序列的变化得到荧光蛋白的概率散布图，该方法用简单的光学装备就可以实现活细胞动态结构的超分辨率成像，成为活细胞超分辨率成像的重要工具之1，活细胞超分辨率显微技术研究获进展。

贝叶斯定位显微技作为细胞成像新的重要工具，它仍然有3个关键的问题没有解决：1）在精度方面，存在严重的结构缺失，定位精度不高；2）在速度方面，该方法极其耗时，为了得到1.5μm的超分辨率结构，大约需要6小时，并且随着图象尺寸的增加，计算时间急剧增长；3）在分析尺度方面，由于速度的限制，该方法很难获得全细胞大尺度长时间的动态变化。

针对以上问题，实验人员通过将单份子定位和贝叶斯技术相结合，开发了1种新型活细胞超分辨率显微技术（singlemoleculeguidedBayesianlocalizationmicroscopy，SIMBA），该技术有以下优点：1）适用范围广，不需要任何额外的硬件装备，就能够与主流TIRFM、PALM、STROM和light-sheet显微镜相结合，便于推行和使用；2）时空分辨率高，减少了结构伪迹的同时实现了50nm的空间分辨率和0.5⑵s的时间分辨率；3）运行速度快，相比3B，加速比超过100倍，并且随着图象尺度的增大，加速效果更加明显；4）分析尺度大，实现了全细胞大尺度长时间动态变化分析，活细胞超分辨率显微技术研究获进展。

活细胞超分辨率显微技术是当前研究的热门，开发新型活细胞超分辨率成像探针和新方法是中科院生物物理所徐平勇课题组的重要研究方向。该工作遭到国家“973”计划、国家自然科学基金、北京市自然科学基金、中科院基金先导项目等的资助，活细胞超分辨率显微技术研究获进展，并申请专利“1种贝叶斯显微成像方法”。

编译自：Livecellsinglemolecule-guidedBayesianlocalizationsuperresolutionmicroscopy.CellRes2016Dec30.