在HIV检测中大展身手的RPA

在HIV诊治中，即时检测是非常重要的，对婴儿来讲更是如此。有案例显示，HIV感染后立刻进行医治就可以控制住患者体内的病毒，让它们没法进行复制。举例来讲，生来就携带HIV的密西西比婴儿，在诞生后立即得到了医治。后来这个孩子停药了两年多，病毒复制仍然得到了控制。

目前婴儿HIV诊断的金标方法是DNAPCR，但许多地区其实不具有这样的条件。在这类条件下，RPA技术正好可以大展身手。

纸做的HIVDNA检测装置

2012年9月，研究人员开发了1个由纸、玻璃纤维和塑料制成的装置，用来对HIV的DNA进行RPA扩增。这个装置本钱低、小巧轻便、而且易于使用，只需5步就能够弄定HIV检测。扩增结果可以通过侧流层析试纸来读取。

人们可以先从婴儿的干血斑样本中提取DNA，然后再进行RPA扩增。研究显示，用这个装置进行RPA扩增反应，能在105分钟内将10拷贝的HIVDNA扩增到可检出的水平。可见，这是1个前景广阔的低本钱即时检测装置。

RPA检测HIVDNA的实战效果

如果不能及时检测婴儿体内的HIV⑴，就会延误医治并影响治疗效果。2013年的1项研究设计了靶标HIV⑴基因组不同区域（长末端重复LTR和pol）的两种探针。研究人员用这两个探针分别进行RPA扩增，然落后行荧光检测和侧流层析试纸检测。研究表明，在HIV检测中大展身手的RPA，这样的方法能够可靠地检测到3拷贝的前病毒DNA。研究人员在此基础上测试了多个HIV⑴突变株，pol和LTR引物的扩增率分别为98.6%和93%。

这是1个能检测出HIV⑴所有主要亚型的等温扩增法，能够在资源匮乏的地区帮助人们诊断携带被HIV感染的婴儿。

文献来源：RapiddetectionofHIV⑴proviralDNAforearlyinfantdiagnosisusingrecombinasepolymeraseamplification.

HIVDNA的实时定量检测

今年5月，研究人员使用内参和标准曲线，通过RPA扩增定量了HIV⑴DNA的浓度。这是1种基于实时荧光数据的定量RPA技术，被称为qRPA，在HIV检测中大展身手的RPA。

这项研究通过1系列实验，分析和定量了不同浓度的HIV⑴DNA样本。研究显示，在所有测试的浓度范围内，qRPA的预测值与正确值在1个数量级以内。可见，定量RPA（TwistAmpexo）可以作为核酸定量的有力工具，用于即时检测和体外诊断。

文献来源：QuantificationofHIV⑴DNAusingReal-TimeRecombinasePolymeraseAmplification,AnalyticalChemistry

不插电的HIVDNA检测

绝大多数核酸扩增（包括等温扩增）都需要电，在HIV检测中大展身手的RPA。但在资源匮乏的区域，比较好是有不需要延续供电的诊断工具。RPA的工作温度在25⑷3°C之间，不需要严格控制孵育温度，就能够到达理想的性能。

今年9月的1项研究显示，当室温在31°C-43°C之间时，孵育20分钟RPA反应就可以成功进行，检测到10拷贝的HIV⑴前病毒DNA。

当室温降到30°C以下时，RPA的扩增性能有所降落。为此，在HIV检测中大展身手的RPA，研究人员开发了1个简单的化学加热器，在室温10⑶0°C时孵育HIV⑴RPA反应。研究显示，RPA的性能通过加热孵育得到了恢复，能检测到10拷贝的HIV⑴前病毒DNA。

研究人员在15°C、20°C、25°C和30°C，用这类加热器进行了12个RPA反应，结果全部扩增成功。他们还发现，当温度较低时，孵育30分钟能增进RPA的扩增性能。研究表明，对RPAHIV⑴反应进行化学加热，与电力设备效果差不多。这也说明，RPAHIV⑴检测不需要多好的设备，就可以够实现高灵敏度的诊断。

文献来源：Non-InstrumentedIncubationofaRecombinasePolymeraseAmplificationAssayfortheRapidandSensitiveDetectionofProviralHIV⑴DNA.